REAL-TIME PCR

qPCR 服務 qPCR Service

基因晶片的結果目前尚需 QPCR 之實驗確認，客戶由基因晶片實驗所得到的基因，可經由此服務作進一步確認，提高基因晶片分析結果之可靠性，研究者也可依此結果作進一步的實驗設計，加快實驗結果產出效率。本公司目前所提供的 PCR 服務項目包含引子設計 (SYBR)，引子代訂 (TaqMan)，cDNA 合成與 QPCR 服務。

產品介紹
詳細規格
產品特點

詳細規格

我們目前是以 Roche LightCycler 與 Agilent Mx3000p 為客戶提供 QPCR 服務

QPCR 樣品種類可分為：

DNA：偵測染色體區域的 copy number 變化、SNP。
RNA：測量基因表現的變化。

目前提供 QPCR 偵測的方法有：

SYBR assay，每基因每樣品量測三重複。
TaqMan assay，每基因每樣品量測三重複。
hybridization probe assay，每基因每樣品量測三重複。

樣品條件

檢體類別：DNA、RNA 或組織、血液、細胞 ( 威健另提供樣品 DNA、RNA 抽取服務 )

檢體需求：

DNA
QC 方式：OD260/280 量測 DNA 量及純度。

DNA QC 標準：
DNA 濃度	DNA 總量	OD260/280
≧ 50 ng/μL	≧ 500 ng ( 體積 10μL 以上 )	≧1.8

RNA
QC 方式：以 Agilent 2100 Bioanalyzer 確定 RNA 完整度，並測量 OD260/280 確認 RNA 量及純度。RNA 需求量及濃度依實驗設計有所不同，須與當區業務進行討論。

RNA QC 標準：
260/280	28S/18S	RIN值 (Bioanalyzer)
1.8~2.1	≧1.2	≧7

組織、血液、細胞：檢體條件請參考核酸萃取的檢體條件

引子設計：
客戶需提供物種名稱、基因全名、GeneBank accession number 或基因序列；如為不常用物種並請另外提供測試的物種 RNA ( 威健目前有 Human、Rat、Mouse 的參考用 RNA 與 Human 參考用 DNA )。引子在 PCR 反應特異性之確認 QC，我們是以 Agilent 2100 Bioanalyzer DNA1000 kit 進行毛細管電泳分析 ( 如圖 )，檢視 PCR 產物的長度是否符合預期，若不符合預期 ( 如圖，紅色箭頭指處 )，則 PCR 引子會重新設計，至 QC 通過為止。