REAL-TIME PCR

qPCR 服務 qPCR Service

基因晶片的結果目前尚需 QPCR 之實驗確認,客戶由基因晶片實驗所得到的基因,可經由此服務作進一步確認,提高基因晶片分析結果之可靠性,研究者也可依此結果作進一步的實驗設計,加快實驗結果產

出效率。 本公司目前所提供的 PCR 服務項目包含引子設計 (SYBR),引子代訂 (TaqMan),cDNA 合成與 QPCR 服務。


詳細規格

我們目前是以 Roche LightCycler 與 Agilent Mx3000p 為客戶提供 QPCR 服務

QPCR 樣品種類可分為:
  1. DNA:偵測染色體區域的 copy number 變化、SNP。
  2. RNA:測量基因表現的變化。
目前提供 QPCR 偵測的方法有:  
  1. SYBR assay,每基因每樣品量測三重複。
  2. TaqMan assay,每基因每樣品量測三重複。
  3. hybridization probe assay,每基因每樣品量測三重複。

樣品條件

  1. 檢體類別:DNA、RNA 或組織、血液、細胞(威健另提供樣品 DNA、RNA 抽取服務)

  2. 檢體需求:

    DNA
    QC 方式:OD260/280 量測 DNA 量及純度。

    DNA QC 標準 :
    DNA 濃度 DNA 總量 OD260/280
    ≧ 50 ng/μL ≧ 500 ng (體積 10μL 以上) ≧1.8

    RNA
    QC 方式:以 Agilent 2100 Bioanalyzer 確定 RNA 完整度,並測量 OD260/280 確認 RNA 量及純度。RNA 需求量及濃度依實驗設計有所不同,須與當區業務進行討論。

    RNA QC 標準:
    260/280 28S/18S RIN值 (Bioanalyzer)
    1.8~2.1 ≧1.2 ≧7

    組織、血液、細胞:檢體條件請參考核酸萃取的檢體條件

  3. 引子設計:

    客戶需提供物種名稱、基因全名、GeneBank accession number 或基因序列;如為不常用物種並請另外提供測試的物種 RNA 。(威健目前有 Human、Rat、Mouse 的參考用 RNA 與 Human 參考用 DNA) 引子在 PCR 反應特異性之確認 QC ,我們是以 Agilent 2100 Bioanalyzer DNA1000 kit 進行毛細管電泳分析( 如圖 ), 檢視 PCR 產物的長度是否符合預期,若不符合預期( 如圖,紅色箭頭指處 ),則 PCR 引子會重新設計,至 QC 通過為止。

實驗流程

報告內容

高通量 Q-PCR 分析服務報告

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